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点击次数：890 发布时间：2015/1/23 11:05:36
将具有专一性之抗体固著（coating）于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体
加入待测检体，检体中若含有待测之抗原，则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结
洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一次抗体，与待测抗原进行键结
洗去多余未键结一次抗体，加入带有酵素之二次抗体，与一次抗体键结
洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，以肉眼或仪器读取呈色结果
间接法
间接法常用于检测抗体，一般之操作步骤为：
将已知之抗原固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余之抗原。
加入待测检体，检体中若含有待测次抗体，则其会与塑胶孔盘上的抗原进行专一性键结。
洗去多余待测检体，加入带有酵素之二次抗体，与待测次抗体键结。
洗去多余未键结二次抗体，加入酵素受质使酵素呈色，藉仪器（ELISA reader）测定塑胶盘中的吸光值（OD值），以评估有色终产物的含量即可测量待测抗体的含量。
竞争法
竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原，其操作步骤为：
将具有专一性之抗体固著于塑胶孔盘上，完成后洗去多余抗体
加入待测检体，使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结
加入带有酵素之抗原，此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结，由于塑胶孔盘上固著的抗体数量有限，因此当检体中抗原的量越多，则带有酵素之抗原可键结的固著抗体就越少，亦即，两种抗原皆竞相与塑胶孔盘上抗体键结，即所谓竞争法之由来。
洗去检体与带有酵素之抗原，加入酵素受质使酵素呈色，当检体中抗原量越多，代表塑胶孔盘内留下之带有酵素的抗原越少，显色也就越浅。
当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够的纯化抗体以固著于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。
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