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点击次数：1061 发布时间：2015/5/20 16:23:53
偶联ELISA试剂盒与亲和素和生物素
一、亲合素主要包括卵白亲合素、链亲合素、卵黄亲合素及类亲合素等。后两种因其特异性亲合力低，研究不多，前两种目前已深入研究并得到广泛应用。
亲合素又称卵白素或抗生物素，分子量为68000，pI 10～10.5；在pH9～13缓冲液中性质均稳定，耐热并耐多种蛋白水解酶的作用。天然亲合素为碱性蛋白，由4个相同的亚单位构成4聚体；每个亲合素亚单位通过其结构中的色氨酸残基与生物素中的Ureido环（I环）结合。因此，1个亲合素分子存在4个与生物素分子结合位点，其结合常数（Ka）高 达1015mol/L。
通常，亲合素的活性单位是以亲合素结合生物素的量来表示的，即以能结合1ug生物素所需要的亲合素量为1个亲合素活性单位。一般1ug亲合素约含13～15个活性单位。
二、生物素又称维生素H，分子量244.31，存在于蛋黄中。用化学方法制成的衍生物，生物素-羟基琥珀亚胺酯（BNHS）可与蛋白质、糖类和酶等多种类型的大小分子形成生物素医学教育网整理化的产物。亲和素与生物素的结合，虽不属免疫反应，但特异性强，亲和力大，两者一经结合就极为稳定。由于1个亲和素分子有4个生物素分子的结合位置，可以连接更多的生物素化的分子，形成一种类似晶格的复合体。因此把亲和素和生物素与ELISA试剂盒偶联起来，就可大大提高ELISA试剂盒的敏感度。
亲和素-生物素系统在ELISA试剂盒中的应用有多种形式，可用于间接包被，亦可用于终反应放大。可以在固相上先预包被亲和素，原用吸附法包被固相的抗体或抗原与生物素结合，通过亲和素-生物素反应而使生物素化的抗体或抗在相化。这种包被法不仅可增加吸附的抗体或抗原量，而且使其结合点充分暴露。另外，在常规ELISA试剂盒中的酶标抗体也可用生物素化的抗体替代，然后连接亲和素-酶结合物，以放大反应信号。
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